La Influenza A H1N1 es una enfermedad febril respiratoria con síntomas similares a los de la infección con el virus de la influenza estacional: fiebre, tos, dolor de cabeza, molestia en garganta, rinorrea, dolor de músculos y en algunos casos diarrea y vómito.  La infección resulta ser auto-limitante y sin complicaciones graves, pero existen casos que presentan una enfermedad respiratoria severa causando incluso la muerte.

Imagen tridimensional por computadora del virus de la Influenza.

El brote de influenza que se vive actualmente es causado por un nuevo subtipo del virus de la Influenza A denominado H1N1 (2009) que fue identificado el pasado abril. Este virus se ha diseminado rápidamente por todo el mundo causando una epidemia a nivel mundial siendo ahora la cepa de Influenza predominante. Los datos reportados por la Secretaría de Salud al 19 de octubre, confirman un total de 45,800 casos de infecciones por esta cepa con 271 defunciones en México, mientras que la OMS tiene aprox. 400,000 casos de infecciones con aprox. 4,700 muertes. Debido al comportamiento de este virus, a la forma tan rápida en que se disemina, a que la mayoría de los casos son autolimitantes y a que la OMS ya no solicita reportes diarios de todos los casos en cada país, es muy probable que los casos reportados sean menores que los reales.

Existen cuatro medicamentos antivirales para el tratamiento de la influenza: amantadina, rimantadina, oseltamivir y zanamivir. El análisis del virus de la Influenza A H1N1 (2009) indica que es resistente a la amantadina y a la rimantadina. Por lo que  los medicamentos que permiten el tratamiento son el oseltamivir (nombre comercial Tamiflu®) y el zanamivir (nombre comercial Relenza®). Ambos evitan que los virus se reproduzcan en el cuerpo, provocando que la enfermedad sea más leve y la recuperación más rápida. Su uso está controlado por lo que deben ser prescritos por un médico.

Todos los virus de la influenza cambian de manera constante, por lo que, para protegernos contra las nuevas variantes, cada año se generan nuevas vacunas para la influenza estacional. El nuevo virus H1N1 (2009) es diferente al virus de influenza A que anteriormente infectaba a los seres humanos, por lo que las vacunas de la influenza estacional no brindan protección contra este nuevo virus; afortunadamente, la capacidad para generar una vacuna contra este nuevo virus está altamente desarrollada.

En Querétaro el laboratorio BIMODI (especializado en Diagnóstico Molecular) realiza el estudio de PCR para la detección y tipificación del Virus de la Influenza A H1N1 (2009).  El resultado consta de dos partes: uno que indica si se ha detectado cualquier tipo de virus de la influenza A y el segundo si se trata del subtipo H1N1 (2009).

Para diagnosticar una infección por Influenza A H1N1 (2009), se debe recolectar una muestra de secreción respiratoria en los primeros 4 a 5 días de aparición de la enfermedad, el estudio no puede realizarse en una muestra de sangre.

Existen varias pruebas para el diagnóstico de la influenza en especímenes respiratorios, estas incluyen: Las pruebas rápidas que detectan directamente a los antígenos, el aislamiento de virus en cultivo y la detección molecular de ARN específico del virus de la influenza mediante Transcripción Reversa y Reacción en Cadena de la Polimerasa en tiempo real (rRT-PCR).

Las pruebas difieren en su sensibilidad y especificidad para detectar los distintos virus de la influenza, en su disponibilidad comercial, en el tiempo transcurrido desde la toma de muestra hasta la obtención del resultado, en su estatus de aprobación por las autoridades y en su habilidad para distinguir entre los diferentes virus de influenza (tipo A o B) y distintos subtipos de influenza A (por ejemplo virus H1N1 (2009) versus virus H1N1 estacional o H3N2 estacional).

En este momento, la forma más adecuada para realizar la detección del virus de la influenza H1N1 2009 es mediante la búsqueda del material genético del virus, utilizando la técnica molecular antes mencionada. No todos los ensayos por amplificación de ácidos nucleicos pueden diferenciar específicamente al virus de la influenza A H1N1 2009 de otros virus de la influenza A. Si se requiere determinar si una infección se debe al virus A H1N1 debe de realizarse una prueba específicamente diseñada para este objetivo. Existen varios ensayos moleculares, comerciales o generados por la academia, para el diagnóstico de influenza A H1N1.  La Secretaria de Salud actualmente está diagnosticando por medio de estas técnicas y varios laboratorios estatales han sido equipados para realizar estos estudios. Lo que suelen buscar estos estudios es identificar si la infección se debe a un virus de la influenza tipo A y específicamente si se trata de un virus A H1N1 2009, así que por lo general el análisis consta de dos partes o dos identificaciones, una que arroja un resultado sobre los virus de la influenza tipo A y otro que discierne si se trata específicamente del subtipo A H1N1 2009.

Las pruebas rápidas que suelen detectar los antígenos (proteínas) del virus son muy poco sensibles para esta nueva cepa H1N1 2009 (sensibilidad promedio del 60%) por lo que al usarlas se corre un alto riesgo de obtener resultados falsos negativos. Esto significa que un resultado negativo de una prueba rápida no excluye una infección por virus de la influenza, ya que en el mejor de los casos (70% de sensibilidad) 3 de cada 10 pacientes que verdaderamente están infectados por el virus, no obstante, tendrán un resultado negativo. Además no pueden distinguir si se trata de la Influenza A estacional o  del nuevo virus H1N1 (2009). Dado todo lo anterior, sería prudente que los laboratorios que realizan pruebas rápidas pusieran alguna nota en sus reportes acerca de las limitaciones de la prueba, de manera que los médicos puedan tomar mejores decisiones  en el manejo de los pacientes.

Esta pandemia es un proceso de la naturaleza que ya ha sucedido con anterioridad, el ejemplo más dramático es la epidemia de influenza que inició en España en 1918 y que mató a 50 millones de personas, estos fenómenos son cíclicos por lo que seguirán sucediendo en el futuro.

Es indispensable que todos sigamos aplicando las medidas sanitarias necesarias para reducir al máximo los contagios y acudir al médico ante cualquier síntoma que haga sospechar de una infección con este virus.

Este artículo fue publicado en:

http://amazingsoftware.dnsalias.com/qroestabien/tarticulos.aspx?DSP,+++++++++H1N1

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El 16 de julio de 1918 El último zar de Rusia, Nicolás II, su esposa la zarina Alejandra y sus cinco hijos: María, Tatiana, Olga , Anastasia y el príncipe heredero Alexei, junto con su médico Eugeny Bptkin y tres sirvientes: el ayudante de cámara Alexei Trupp, el cocinero Ivan Jaritonov y la doncella de la zarina Ana Demidova, se encontraban prisioneros en una casa en los Urales rusos y fueron asesinados por un pelotón del ejercito bolchevique, para evitar que fuesen rescatados por los rusos blancos.

A partir de aquí surgieron rumores sobre lo que había sucedido con los cadáveres, casi a manera de leyenda se decía que los ejecutores habían colocado los cadáveres en un camión para enterrarlos en una mina abandonada, pero el camión quedó atascado en el lodo del bosque por lo que dos de los cuerpos fueron rociados con gasolina para incinerarlos, pero la combustión no logro eliminar los cuerpos. Finalmente, los cadáveres fueron arrojados a una fosa cavada a toda prisa, después se rociaron con ácido sulfúrico en un intento por destruir todos los rasgos que pudieran servir para su identificación. Sin embargo, por otro lado corrían rumores, fomentados por el régimen soviético de la época, de que la familia real habían sido enviada a un sitio seguro para protegerlos, se decía que la zarina y los niños habían sido trasladados a Alemania, incluso se dijo que el zar se encontraba en el Kremlin y que la monarquía sería restaurada una vez que la revolución hubiese eliminado a la burguesía.

En junio de 1991 el geólogo ruso Aleksander Avdoni tras años de investigación, exhumó restos de personas de una tumba poco profunda en un bosque de abedules a las afueras de Ekaterimburgo. Avdonin creía haber localizado el lugar de reposo de los últimos Romanov, la familia real de la Rusia Imperial. El descubrimiento prometía introducir alguna prueba objetiva en el debate de las leyendas; la veracidad de la historia de la ejecución dependía de que se pudiera demostrar que los restos eran efectivamente de los Romanov.

Cuando se reconstruyeron todos los cadáveres desenterrados quedó claro que sólo había restos de nueve cuerpos, dos menos que los que tendría que haber si se hubiesen enterrado en la misma tumba a todas las víctimas de la matanza que en tres minutos puso fin a la dinastía que había dominado Rusia durante trescientos años. Tras el laborioso proceso de recomponer más de ochocientos huesos y reconstruir los cráneos destrozados por las culatas de los fusiles del pelotón de enterramiento, se llegó a la hipótesis de que los nueve esqueletos eran los del zar, la zarina, sus tres hijas mayores, su médico y los tres sirvientes, no había rastro de la hija pequeña Anastasia ni de Alexei el príncipe heredero, ¿a qué otras pruebas podrían someterse los restos para confirmar su identidad?

Primero se realizaron genotipos mediante la utilización de microsatelites con lo que se confirmo que los esqueletos correspondían a un grupo familiar de dos padres y tres hijas (este estudió además confirmó el sexo de las personas). El ADN de los restos atribuidos al doctor y los sirvientes, demostró que no estaban emparentados con el grupo familiar ni entre ellos, hasta aquí todo coincidía con las conclusiones de los expertos en antropología física forense. Al estudiar el ADN mitocondrial del grupo familiar se encontraron dos secuencias diferentes: la mujer adulta, la supuesta zarina y sus tres hijas tenían secuencias de ADN mitocondrial idénticas. El varón adulto de la familia, el supuesto zar tenía una secuencia diferente. Esto era exactamente lo que cabe esperar de una familia, las tres hijas habían heredado el ADN mitocondrial de su madre, mientras que el padre, hijo de una madre diferente, no había transmitido el suya a ninguna de las hijas.

Sin embargo la secuenciación del ADN mitocondrial por sí sola no identificaba a esta familia como los Romanov; cualquier familia presentaría el mismo patrón de identidad entre madre e hijos, con una secuencia diferente para el padre. La única manera de demostrar si se trataba de la familia real era localizar a parientes vivos del zar y de la zarina, que estuviesen conectados con los difuntos mediante una serie de conexiones ininterrumpidas totalmente maternas. El zar tenía una conexión materna que partía de su abuela, Louise de Hesse-Cassel, reina de Dinamarca, y que llegaba al conde Nicolai Trubetskoy, de sesenta años de edad y que vivía en Francia. La zarina podía trazar una línea materna directa a través de su hermana, la princesa Victoria de Hesse y que llegaba hasta su alteza real el príncipe Felipe, duque de Edimburgo y esposo de la reina Isabel II de Inglaterra. Tras una discreta negociación ambos hombres accedieron a proporcionar una muestra de sangre para realizar el análisis.

Se encontró que el ADN mitocondrial del príncipe Felipe coincidía exactamente con el de la presunta zarina y sus hijas. Pero al comparar el ADN mitocondrial del supuesto zar con el del conde Trubetskoy se encontró una muy ligera diferencia, una que podría explicarse por una mutación como la causa más probable, pero que sin embargo dejaba un pequeño espacio para la duda. Finalmente, se logró una identificación absoluta del zar gracias a que en un museo se tenía conservada una camisa que había utilizado el zar durante un viaje a China , en el cual sufrió un atentado donde fue herido en la cabeza con un sable, su camisa quedó impregnada con sangre y fue guardada en el museo sin ser lavada, al recuperar la camisa de los archivos del museo y de esta el ADN de la sangre se logró obtener un genotipo idéntico al del cadáver del padre de la familia, el zar.

No obstante todo lo anterior quedo en pie un misterio, solo se habían encontrado los cadáveres de tres niñas, faltaba el de una niña y un niño para completar la familia, esto concordaba sin embargo con algunos rumores de que algunos de los niños habían escapado a la matanza. Cuando los soviéticos declararon que solo el zar había muerto y su familia había sido enviada a un lugar seguro, rápidamente comenzaron a aparecer impostores, algunos claramente obvios. Sin embargo surgió una mujer, Anna Anderson, que se clamaba era Anastasia, su identidad levantó gran polémica, murió en 1984 sin que la cuestión llegase a resolver de modo concluyente. Sin embargo en  tras un emocionante trabajo detectivesco se logró recuperar ADN mitocondrial procedente de una biopsia se la había practicado a Anna Anderson, cuando fue hospitalizada en 1979 para someterse a una operación por una obstrucción intestinal. La secuencia del ADN mitocondrial resulto ser totalmente distinta a la de la zarina, era imposible que Anna Anderson fuera Anastasia.

Finalmente fue encontrada una segunda tumba a unos metros de la primera donde se encontraron algunos restos óseos, el análisis de ADN demostró que se trataba de los dos hijos del zar que no se habían encontrado, y que corroboraban que efectivamente dos de los cuerpos habían sido incinerados.

De esta manera las pruebas de ADN resolvieron de golpe una de las más duraderas y románticas sagas de misterio que cautivaron al mundo a principios del siglo XX, y logró esclarecer la identidad de los cadáveres de los Romanov con un grado de certeza irrefutable.

Artículo publicado en: http://www.oem.com.mx/diariodequeretaro/barroco.aspx, el día viernes 1º de Noviembre de 2009.

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Recientemente se han popularizado los estudios de ADN, gracias principalmente a su mención en programas de televisión, desde telenovelas donde se resuelven casos de paternidad, hasta series de investigadores forenses que logran resolver sus casos gracias a modernísimas tecnologías para el análisis de las evidencias encontradas en la escena del crimen. Pero ¿qué son precisamente estos estudios y cómo se utilizan para coadyuvar a los criminalistas?

El ADN (ácido desoxirribonucleico) es la sustancia que los seres vivos utilizan para almacenar su información genética. Dentro de las células de todos los seres vivos se encuentra este ácido en el cual está codificada la información que hace a un ser específico ser lo que es.

Todos los humanos tenemos por duplicado nuestro material genético, una de las copias la heredamos de nuestra madre y la otra de nuestro padre. Esto nos confiere nuestra individualidad pues incluso los hermanos (hijos de la misma madre y del mismo padre) no heredan exactamente la misma mitad de cada uno de sus progenitores (salvo en el caso de hermanos gemelos idénticos).

De lo anterior se deduce que mediante el estudio del ADN es posible obtener información que nos permita identificar con gran certeza a un individuo, de manera similar a como se hace con las huellas dactilares.

Para realizar este tipo de estudios suelen analizarse varios marcadores genéticos (llamados microsatélites), que tienen la característica de ser altamente polimórficos, es decir existen variaciones de cada marcador en la población y por lo tanto generalmente son diferentes entre un individuo y otro.

Al resultado del estudio de varios microsatélites se le conoce como Genotipo y éste resulta ser único para cada individuo. Cuando se analizan 15 marcadores genéticos todos ellos altamente polimórficos se puede llegar a tener una certeza de identificación de un individuo de aproximadamente uno en cien mil billones (1/1.31×10^17) o dicho en otras palabras la probabilidad de encontrar al azar a dos personas con los 15 marcadores genéticos idénticos es de 7.65 X10^-18.

Gracias a esto, este tipo de estudios se utilizan en medicina forense para realizar la identificación de individuos, por ejemplo se puede analizar el material genético de una muestra dejada por un criminal al cometer un delito (sangre, semen, pelo, piel, etc.) con una muestra tomada a un sospechoso para ver si se trata de la misma persona. De hecho hoy en día en los Estados Unidos de América, a todos los prisioneros, además de tener en su expediente una marca de sus huellas dactilares, también se les hace una toma de muestra para tener registrado su Genotipo. Toda esta información, junto con los genotipos obtenidos en muestras tomadas en escenas de crímenes, está almacenada en una gran base de datos que ha permitido a los investigadores ser mucho más eficiente en la resolución de sus casos, pues existe mucha menos cabida al error y en muchas ocasiones este tipo de estudios ha permitido resolver casos que de otra manera hubiesen quedado sin conclusión. Incluso actualmente se han resuelto casos no resueltos por más de 20 años, utilizando este tipo de técnicas y se han encontrado criminales que se pensaba que era imposible identificar.

Gracias al alto polimorfismo de los microsatélites, las dos copias de los marcadores genéticos que un individuo hereda, una del padre y la otra de la madre, generalmente no son iguales entre sí, sin embargo forzosamente una de las copias de los marcadores genéticos de un individuo debe de ser igual a una de las de su padre y la otra a una de las de su madre. De tal manera que los análisis del ADN también puede utilizarse para realizar estudios de paternidad, los cuales no solamente han servido para esclarecer dudas de carácter personal sino que tienen una función importante en la impartición de justicia en casos legales de reconocimiento de paternidad con sus consecuentes asignaciones de derechos y obligaciones.

Estos estudios también han sido utilizados para llevar a cabo el reconocimiento de cadáveres que, dado su estado de descomposición, resultan irreconocibles por otros métodos. Puede compararse una muestra del cadáver con muestras de los supuestos padres o hijos del difunto, o con alguna muestra que dicha persona haya dejado en el pasado (por ejemplo en su cepillo de dientes, su ropa u otros objetos personales). Algunos ejércitos de los países del primer mundo han comenzado a almacenar un banco de muestras de todos sus reclutas previendo que algún día puedan llegar a requerir llevar a cabo la identificación de alguno de ellos mediante estos métodos.

Por otro lado quisiéramos mencionar que también se pueden realizar estudios similares utilizando marcadores genéticos localizados en el cromosoma Y. El cromosoma Y, determina el sexo de una persona, los varones tienen un cromosoma Y y un cromosoma X mientras que las mujeres tienen dos cromosomas X (y no tienen cromosoma Y).

Cada varón hereda su cromosoma Y de su padre, de manera que analizar a este cromosoma nos permite estudiar la línea paterna de parientes de un individuo; inclusive saltándonos alguna generación, es decir se puede discernir si una persona es el abuelo paterno de otra sin necesidad de estudiar a la generación intermedia o si dos hombres son hermanos, hijos del mismo padre sin necesidad de estudiar al padre o si dos primos comparten al mismo abuelo paterno sin analizar a sus padres o al abuelo.

El estudio del cromosoma Y, además permite analizar muestras en las que el ADN de un varón este mezclado con el ADN de una mujer, esto sin que el ADN de la mujer interfiera en el análisis. Tales casos ocurren en agresiones sexuales, donde suele recuperarse una muestra de exudado vaginal la cual contiene una mezcla de células de la ofendida y del agresor. Si el ADN presente en este tipo de muestras se quiere comparar con muestras de un acusado, es de suma importancia contar con metodologías que permitan analizar la muestra adecuadamente, el análisis del cromosoma Y permite analizar muestras donde el ADN de la mujer se encuentre hasta 1000 veces más concentrado que el ADN de varón.

Otro posible estudio que se puede realizar con métodos moleculares es el análisis del ADN mitocondrial. Este ADN tiene la característica de que se hereda por vía materna, de manera que todos tenemos el mismo ADN mitocondrial que nuestra madre, y por lo tanto que nuestros hermanos, hijos de la misma madre. Así, dos personas tendrán secuencia de ADN mitocondrial idénticas si se encuentran relacionados de manera que se pueda trazar una línea materna directa entre los dos, las conexiones debe de ser exclusivamente maternas, y no estar interrumpidas por una conexión paterna. Dado lo tanto el ADN mitocondrial, al igual que los microsatélites del cromosoma Y, no permite identificar a un individuo en particular (pues puede ser confundido con sus hermanos), mas bien indica a que familia pertenece, esto puede sin embargo resultar extremadamente útil en ciertas circunstancias. Además una de las grandes ventajas del ADN mitocondrial radica en que es mucho más estable que el resto del ADN por lo que se conserva incluso en cadáveres de varios años, de hecho ha sido posible analizarlo en fósiles de los hombres de las cavernas.

Actualmente la National Geographic Society se encuentra realizando el proyecto “GENOGRAPHIC”, el cual consiste en recolectar por lo menos 100,000 muestras genéticas de personas de alrededor de todo el mundo, con especial énfasis en los pueblos indígenas, o etnias minoritarias. A estas muestras se les analiza el ADN mitocondrial y el cromosoma Y con la intención de generar una especie de “árbol genealógico de la humanidad” y de esta manera comprender mejor la historia genética y migratoria de la raza humana. Hasta el momento el proyecto a ratificado la idea de que la humanidad surgió en África y de ahí salió para poblar el mundo entero, se han comenzado a determinar las rutas migratorias que los antiguos humanos siguieron, comprobándose por ejemplo que los primeros pobladores de América provinieron de Asia a través del estrecho de Bering. Es importante que este proyecto se realice con prontitud pues la gran capacidad de desplazamiento con la que contamos actualmente ha comenzado a llevar a la movilización de los distintos pueblos y sus individuos por todos los rincones del mundo, lo que podría enmascarar a las migraciones del pasado. Con esto queda claro que los estudios del ADN no solo tienen cabida en casos forenses, en la actualidad han permitido a los antropólogos y arqueólogos a fortalecer sus estudios en varios campos.

Cabe destacar que esta tecnología, aunque sofisticada, se encuentra cada vez más a la mano de la población en general. En Querétaro ya contamos con un laboratorio especializado en la realización de estudios de ADN que ofrece sus servicios a la población en general y cuyos integrantes fungen como peritos en casos legales que lo requieren.

Artículo publicado en: http://www.oem.com.mx/diariodequeretaro/barroco.aspx, el día viernes 1º de Noviembre de 2009.

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En el caso específico del actual brote por VI-OP, se recomienda realizar RT-PCRs en tiempo real para Influenza A, B, H1, H3. Por el momento, el virus de la influenza A (H1N1) de origen porcino dará un resultado positivo para influenza A y negativo para H1 y H3 mediante RT-PCR. Actualmente la confirmación de VI-OP se realiza por un PCR en tiempo real con sondas específicas para este virus o mediante secuenciación que permita detectar mutaciones ya caracterizadas de esta cepa.

La cantidad de tiempo que una persona infectada arroja viriones se desconoce para la influenza A (H1N1) de origen porcino, VI-OP. Por lo tanto, mientras no estén disponibles los datos correspondientes, la estimación de la duración del esparcimiento de virus se basa en la infección por el virus de la influenza estacional. Al momento se cree que el VI-OP tiene las mismas propiedades en términos de esparcimiento que los virus de la influenza estacional. Con la influenza estacional, los estudios han mostrado que las personas pueden ser contagiosas desde un día antes de desarrollar síntomas y hasta 7 días después de enfermarse. Los niños, especialmente los más jóvenes, en potencia pueden ser contagiosos durante un periodo más prolongado.

El personal clínico debe considerar realizar pruebas en casos sospechosos de infección por VI-OP, especialmente en aquellos con enfermedad severa, mediante la obtención de un espécimen del tracto respiratorio superior para buscar el virus de la influenza A (H1N1) de origen porcino.
Para evitar discrepancias entre los laboratorios y centros de salud se define:
•    Un CASO CONFIRMADO DE INFECCIÓN POR VI-OP como una persona con enfermedad febril respiratoria aguda con una infección por VI-OP confirmada en el laboratorio por una o más de las siguientes pruebas:
1.    RT-PCR en tiempo real (Diagnóstico Molecular)
2.    Cultivo Viral
•    Un CASO PROBABLE DE INFECCIÓN POR VI-OP se define como una persona con enfermedad febril respiratoria aguda, que es positiva para influenza A, pero negativa para H1 y H3 mediante un RT-PCR para influenza estacional.
•    Un CASO SOSPECHOSO DE INFECCIÓN POR VI-OP es definido como una persona con enfermedad febril respiratoria aguda, cuyo inicio se dio:
1-    Dentro de los siete días posteriores a un contacto cercano con una persona que es un caso confirmado de infección por VI-OP.
2-    Dentro de los siete días posteriores a haber viajado a una comunidad donde se ha reportado uno más casos confirmados de infección por VI-OP.
3-    O si  reside en una comunidad donde hay uno más casos confirmados de infección por VI-OP.

Los Especímenes respiratorios idóneos son el Exudado/aspirado nasofaríngeo, o lavado/aspirado nasal. Estos especímenes deberán de ser recolectados tan pronto como sea posible tras el inicio de la enfermedad. Si estos especímenes no se pueden colectar, se puede aceptar la combinación de un exudado nasal con un exudado orofaríngeo. Para los pacientes que están entubados, se deberá de colectar también un aspirado endotraqueal. Los especímenes deberán de colocarse en medio de transporte especial estéril e inmediatamente colocarse en hielo o paquetes refrigerantes a 4°C (Refrigerador) para ser transportados al laboratorio de diagnóstico. Idealmente los exudados deben de ser colectados con hisopos de punta sintética (p.e. polyester, o Dacrón) y mangos de aluminio o plástico, los hisopos con punta de algodón y mangos de madera no se recomiendan. Los especímenes recolectados con hisopos hechos de alginato de calcio no son aceptables. El vial de colección debe de contener 1-3 ml de medio de transporte.

Los antígenos virales y sus ácidos nucleicos pueden encontrarse de manera focal y distribuidos de manera esparcida en los pacientes con influenza. Las vías aéreas más grandes (particularmente los bronquios primarios y segmentados) tienen la mayor cantidad de virus para la detección de la influenza mediante tinción inmunohistoquímica (IHC). En comparación, el RNA viral es más comúnmente detectado en las vías aéreas bajas. La recolección del tejido adecuado asegura que se tenga la mejor oportunidad de detectar al virus mediante pruebas de tinción inmunohistoquímica y de PCR. Debido a la forma de infección y de localización del virus en el organismo del huésped los estudios no deben de realizarse en muestras de sangre ya que se corre el riesgo muy alto de obtener un falso negativo.

Las pruebas rápidas para diagnostico de influenza pueden ayudar en el diagnóstico y manejo de pacientes que presentan signos y síntomas compatibles con la influenza. Estas pruebas detectan, en especímenes respiratorios, los antígenos de la núcleo-proteína viral de la influenza A y B. Es importante mencionar que las pruebas rápidas para el antígeno de influenza tienen una sensibilidad y especificidad desconocidas para la detección de infecciones en humanos con el virus de la influenza A (H1N1) de origen porcino a partir de especímenes clínicos. Es razonable suponer que las pruebas rápidas que detectan los antígenos de las nucelo-proteínas, pueden detectar al VI-OP en especímenes respiratorios, dado que estos antígenos están altamente conservados en la mayoría de los virus de la influenza A. Sin embargo se sabe que estas pruebas tienen una sensibilidad sub-optima (aprox. 50-60%) para detectar los virus de la influenza estacional cuando se compara con el cultivo viral o la RT-PCR, y su especificidad es de aproximadamente 90-95%. El CDC ha recibido reportes anecdóticos de resultados falsos positivos y falsos negativos.  Por tanto, las pruebas rápidas solo son atractivas cuando no hay un laboratorio de virología cercano o cuando estos se encuentran sobresaturados.

Los clínicos pueden considerar usar la prueba rápida como parte de la evaluación de los pacientes con signos y síntomas compatibles con Influenza, pero los resultados deben de ser interpretados con cautela. Dado que, un resultado negativo con una prueba rápida podría ser un falso negativo y no debe de asumirse como una prueba de diagnóstico final para una infección con VI-OP:
•    Es más probable que ocurran resultados falsos positivos (y verdaderos negativos) cuando la influenza es poco común en la comunidad, lo que generalmente ocurre al inicio y final de un brote.
•    Es más probable que ocurran resultados falsos negativos (y verdaderos positivos) cuando la influenza es común en la comunidad, lo que ocurre típicamente en el punto mas alto de un brote.
•    La sensibilidad de la prueba puede variar dependiendo de cuando, en el curso de la enfermedad, se recolecte el espécimen. Los especímenes respiratorios para las pruebas deben de tomarse en los primeros 4-5 días de iniciada la enfermedad cuando el esparcimiento de virus es mayor.

La confirmación de una infección con el nuevo virus de la influenza A H1N1 de origen porcino solamente se puede realizar mediante transcripción reversa y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) o por cultivo viral.

Por otro lado, las pruebas por inmunofluorescencia pueden diferenciar entre los virus de la influenza A y de la B. Un paciente con una prueba por inmunofluorescencia positiva para influenza A puede llegar a cubrir con los criterios para ser un caso sospechoso. Sin embargo, no es posible diferenciarlo de un virus de la influenza estacional. La inmunofluorescencia depende de la calidad del espécimen clínico, de la habilidad del operador, y tiene una sensibilidad y especificidad desconocidas para detectar infecciones humanas con el virus VI-OP en muestras clínicas. Por lo tanto, un resultado negativo mediante inmunofluorescencia podría ser un falso negativo y no debe de ser considerado como una prueba diagnóstica final para una infección por VI-OP.
El cultivo viral hasta hace poco se consideraba como el estándar de oro como prueba diagnóstico, sin embargo el problema principal es el tiempo que tarda el proceso  por lo que puede no arrojar resultados en un tiempo útil para el manejo clínico. Un cultivo viral negativo no excluye una infección con el virus de la influenza A H1N1 de origen porcino.

Como ya se mencionó la forma adecuada para realizar la detección es mediante la búsqueda del material genético del virus, utilizando la técnica conocida como PCR o reacción en cadena de la polimerasa (esto es lo que se conoce como Diagnóstico Molecular). En este estudio un primer RT-PCR permite detectar si en la muestra se encuentra el Virus de la Influenza A, (este primer PCR detecta a todas las cepas de Influenza A, tanto a la S-OIV como a la de la Influenza Estacional)

En el caso de obtener un resultado positivo para Influenza A, procedemos con los estudios para discernir si se trata de la cepa de origen porcino VI-OP, mediante secuenciación o mediante un PCR en tiempo real específico para este nuevo virus.

Es importante que el personal que trabaja en los laboratorios de diagnóstico, en los que se pudieran llegar a tomar muestras de pacientes infectados con VI-OP, utilicen en todo momento Equipo personal de protección recomendado: protección respiratoria N95 o mayor, protectores de zapatos, zapatos cerrados, bata larga (túnica) cerrada al frente, guantes dobles y protección de ojos. Todo el personal deberá de auto monitorearse para la detección de fiebre y cualquier síntoma. Cualquier enfermedad debe de ser reportada a su supervisor inmediatamente. Para el personal que ha tenido exposición sin protección, o cuyo equipo de protección personal ha sufrido de una abertura hacia material clínico o virus vivo de un caso confirmado de VI-OP, se puede considerar un tratamiento profiláctico con zanamivir o oseltamivir por 10 días tras la exposición.

Los desperdicios se desecharan siguiendo los procedimientos estándar señalados en los manuales de operación de los laboratorios. Los desinfectantes apropiados son: Etanol al 70%, Lysol al 5% o Cloro al 10%.

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El actual brote de influenza que vivimos en México es causado por un nuevo virus  de la Influenza A H1N1 de origen porcino (VI-OP), en ingles las siglas son S-OIV, el cual fue identificado en el pasado abril causando hasta el momento, 8 de mayo de 2009, 2500 casos de personas infectadas en 25 países, siendo México  y Estados Unidos los primeros países afectados. En México se han reportado 1204 casos y 44 muertes por este virus, y se piensa que este número puede aumentar debido a la forma de contagio.

Esta Influenza es una enfermedad febril respiratoria cuyos síntomas son similares a los que se presentan durante la infección con el virus de la influenza estacional: fiebre, tos, dolor de cabeza, molestia en garganta, rinorrea, dolor de músculos y en algunos casos diarrea y vómito.  Los casos hasta ahora reportados indican que la infección resulta ser auto-limitante y sin complicaciones graves, sin embargo existen un número substancial de casos que presentan una enfermedad respiratoria severa causando incluso la muerte, aproximadamente un 5% de infectados tanto en México como en Estados Unidos.

Al igual que todos los virus de la influenza, los virus de la influenza porcina cambian de manera constante, hecho por el cual se tienen que generar nuevas vacunas para la influenza estacional cada año para poder proteger contra la nueva cepa de virus. Los cerdos tienen la característica de poder ser infectados por los virus de la influenza porcina, aviar y humana. Cuando un cerdo se infecta con más de un tipo de virus de la influenza, los virus pueden reagruparse (es decir intercambiar sus genes) y pueden surgir nuevos virus de la mezcla de los virus de la gripe porcina con los de la gripe humana o aviar. El virus que está causando el brote de influenza actual es un nuevo virus que muy probablemente se generó de esta manera.

Los virus de la influenza porcina por lo general no infectan a los seres humanos. Sin embargo, en el último siglo han ocurrido casos esporádicos de infecciones de influenza porcina en seres humanos e incluso en algunos de estos casos se ha contagiado el virus de una persona a otra, muy probablemente de la misma manera que como se contagia la influenza estacional, principalmente cuando las personas tosen o estornudan esparciendo el virus en el ambiente y en cualquier objeto cercano, se sabe que el virus puede mantenerse vivo por más de 48 horas fuera de las células. Los virus de la influenza porcina no se transmiten por los alimentos. Los humanos no pueden contraer influenza porcina por comer carne de cerdo o sus productos si estos han sido manipulados y cocinados de manera adecuada.

Existen cuatro medicamentos antivirales para el tratamiento de la influenza: amantadina, rimantadina, oseltamivir y zanamivir. Sin embargo, el análisis del VI-OP que ha causado el  brote actual indica que este nuevo virus es resistente a la amantadina y a la rimantadina. Por lo tanto,  los dos medicamentos que permiten tratar a la Influenza A H1N1 de origen porcino son el oseltamivir (nombre comercial Tamiflu®) y el zanamivir (nombre comercial Relenza®), Ambos medicamentos evitan que los virus se reproduzcan en el cuerpo, provocando que la enfermedad sea más leve y la recuperación más rápida, los medicamentos son más eficaces si se inicia el tratamiento dentro de los 2 días siguientes a la aparición de la enfermedad. El uso de estos medicamentos se encuentra controlado por lo que deben de ser prescritos por un médico.

El VI-OP es diferente al virus H1N1 de los seres humanos, por lo que las vacunas de la influenza estacional humana no proporcionan protección contra este nuevo virus. Existen vacunas que se administran a los cerdos para la prevención de la influenza porcina, pero no hay una vacuna para proteger a los humanos contra la influenza de origen porcino. Afortunadamente, la capacidad para generar una vacuna contra este nuevo virus está altamente desarrollada y muy probablemente en unos cuantos meses tengamos una vacuna que nos pueda proteger.

Para diagnosticar una infección por VI-OP, se debe de recolectar una muestra de secreción del aparato respiratorio entre los primeros 4 a 5 días de aparición de la enfermedad (cuando una persona infectada tiene más probabilidad de diseminar el virus), cabe mencionar que el estudio no puede realizarse en una muestra de sangre. La forma adecuada para realizar la detección es mediante la búsqueda del material genético del virus, utilizando la técnica conocida como PCR (esto es lo que se conoce como Diagnóstico Molecular), las pruebas rápidas que suelen detectar los antígenos (proteínas) del virus son muy poco sensibles (sensibilidad del 60%) por lo que al utilizarlas se corre un alto riesgo de obtener resultados falsos negativos, además a diferencia del diagnóstico molecular no pueden distinguir si la infección es por un virus de la Influenza A estacional o si se debe al nuevo virus de la Influenza A H1N1 de origen porcino, VI-OP.

Finalmente quisiéramos aclarar que esta epidemia causada por un VI-OP es un proceso de la naturaleza que ya ha sucedido con anterioridad, el ejemplo más dramático del que tenemos registro es la epidemia de influenza que inició en España en 1918 y que mató a 50 millones de personas, estos fenómenos son cíclicos por lo que seguirán sucediendo en el futuro. Es importante que no crea las historias fantásticas que circulan en algunos medios de comunicación primordialmente en la internet sobre la idea de que este virus fue desarrollado artificialmente con fines bioterroristas o para alterar la economía.

Hasta la fecha todo parece indicar que las medidas adoptadas en México para prevenir la diseminación de la enfermedad han dado resultados muy satisfactorios, en un principio puede parecer que estas medidas fueron drásticas, pero las vidas humanas que se han salvado son invaluables. Consideramos que debemos de aprender de esta experiencia para poder estar preparados para emergencias sanitarias de esta naturaleza tal como lo estamos para otras emergencias como erupciones volcánicas, inundaciones, huracanes etc. Es indispensable que perfeccionemos nuestros sistemas de monitoreo epidemiológico y que la población en general conozca y aplique eficientemente las medidas sanitarias necesarias para procurar la salud en general. Creemos que también es importante que comencemos a generar en México una cultura de vacunación del adulto, no solamente de los adultos mayores  y los infantes si no de toda la población.

En Querétaro el laboratorio BIMODI (laboratorio especializado en Diagnóstico Molecular) ofrece el estudio de PCR para la detección y tipificación del Virus de la Influenza A H1N1 de Origen Porcino (VI-OP), el cual realiza en sus instalaciones completamente equipadas para realizar este tipo de estudios. El resultado consta de dos fases uno que se entrega al día siguiente de recibir la muestra, y en él que se indica si se ha detectado el virus de la influenza A, en los casos que el resultado sea positivo, se confirma si se trata del VI-OP, este último se entrega al día siguiente del primer resultado.

Nos encontramos en Prolongación corregidora Nte. 1088 Primer Piso Col Arboledas
Tel (442) 2-34-11-56, Email: info@bimodi.com, www.bimodi.com

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Las micobacterias son bacilos aerobios no esporulantes, de las cuales varias especies son patógenas para el ser humano. Las principales especies patógenas son Mycobacterium leprae y las que integran el complejo Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti). La micobacteria patógena más importante es M. tuberculosis (bacilo de Koch). Esta especie es privativa del ser humano, que constituye su único reservorio. Los bacilos tuberculosos se transmiten por contagio directo de persona a persona a través de las gotitas de fluidos corporales expelidas al toser, estornudar o hablar.

Mundialmente la Tuberculosis (TB) es una de las mayores causas de morbilidad y mortalidad, resultando en el mayor número de muertes debidas a infecciones. Aproximadamente una tercera parte de la población mundial es portadora de M. tuberculosis y corre el riesgo de padecer una infección tuberculosa activa. Mundialmente la enfermedad activa se desarrolla en entre 8 y 10 millones de personas al año. En los países en vías de desarrollo, la TB es responsable de 3 millones de muertes anuales, así como del 26% de las muertes evitables en adultos1-4. En México la TB ocupa el lugar número 17 entre las causas de muerte y el primero como causa de muerte provocada por un solo agente infeccioso. La tasa de incidencia en México es de 25 a 85 por cada 100,000.

M. tuberculosis origina con frecuencia una enfermedad pulmonar crónica, si bien puede afectar también a cualquier órgano corporal. La diseminación de la TB a menudo no es detectada y el desarrollo de la enfermedad puede ocurrir años tras la primera infección. M. tuberculosis puede persistir en el hospedero humano por años sin causar enfermedad en un síndrome conocido como TB latente (1/3 de la población). La detección de infecciones latentes, asintomáticas, y de la enfermedad activa es una estrategia importante para prevenir la Tuberculosis.

Dado el riesgo de diseminación de la enfermedad, la posibilidad de aparición de cepas resistentes a los fármacos antituberculosos y la gravedad de la enfermedad en los pacientes infectados por el VIH-1, es de extrema importancia diagnosticar precozmente las infecciones por el complejo M. tuberculosis.

Las metodología utilizadas de manera rutinaria en los laboratorios para le detección de la tuberculosis requieren del crecimiento o aislamiento del microorganismo en caldos de cultivo o medios sólidos previo a la identificación. Incluso con avances tecnológicos como el sistema BACTEC y MB-Chek (Becton Dickinson) y sondas de ácidos nucleicos, generalmente se requiere de un mínimo de dos semanas antes de que el laboratorio pueda hacer un diagnóstico definitivo de TB. Otra seria limitación de los cultivos es la sensibilidad, aunque el cultivo es considerado como el “estándar de oro” contra el cual todos los demás métodos deben de medirse, su sensibilidad deja espacio para mejoras. Por otro lado, la basiloscopía con la cual se examinan frotis directos del espécimen clínico teñidas por el método de Ziehl-Neelsen para buscar bacilos alcohol-ácido resistentes es rápida pero carece de sensibilidad y es inespecífica. Tampoco las técnicas inmunológicas y serológicas suelen ser de gran utilidad, debido a la ausencia de sensibilidad o de especificidad5-7

El diagnóstico rápido (dentro de 24 horas) de enfermedades infecciosas, particularmente aquellas que representan problemas de salud pública debido a su comunicabilidad, presenta uno de los problemas más retadores para la microbiología clínica. En particular el advenimiento de la tuberculosis, debida en parte a la epidemia de SIDA, ha puesto de manifiesto la necesidad de diagnósticos rápidos, altamente sensibles y específicos.

El diagnóstico molecular y en particular la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR, pos sus siglas en ingles) tiene las características adecuadas para brindar un diagnóstico oportuno y eficiente de enfermedades infecciosas, pues permite detectar el material genético del agente patógeno, incluso antes de que el huésped haya montado una respuesta inmune y producido anticuerpos. La PCR puede detectar cantidades muy pequeñas del patógeno directamente de los especímenes clínicos, por lo que su aplicación para la detección de microorganismos de lento crecimiento como las micobacterias tiene el potencial de ofrecer un diagnóstico rápido y certero de la tuberculosis.

En Biología Molecular Diagnóstica realizamos detección del complejo M. tuberculosis mediante la tecnología de la Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real. La prueba se basa en el principio de amplificación del ADN con iniciadores específicos del complejo M. tuberculosis y detección de los productos de PCR con una sonda Taqman que produce fluorescencia al hibridar de forma específica con el ADN blanco8.

La PCR para detección de tuberculosis se realiza sobre el ADN purificado directamente de los especímenes clínicos, sin necesidad de realizar un cultivo. Pueden analizarse muestras de expectoración, lavados bronquiales, jugo gástrico, derrames pericárdicos, derrames pleurales, líquido de ascitis, líquido cefalorraquídeo, orina y en general de casi cualquier fluido o tejido corporal donde se sospeche que se encuentra la bacteria. La sensibilidad de la PCR en estos especímenes es del 83-94%, la especificidad del 98-100%, el valor predictivo positivo es de 86-100% y el valor predictivo negativo de 96-98% comparados con el diagnóstico por cultivo10,11.

En general se ha pensado que la detección de M. tuberculosis en sangre no es muy adecuada cuando se trata de una infección pulmonar pues se ha creído que la bacteria permanece confinada dentro de la pleura. De hecho los cultivos de sangre de pacientes con tuberculosis pulmonar confirmada de manera definitiva detectan a la bacteria solamente en 4% de los casos (11% si se consideran solamente los pacientes VIH positivos) 12. Recientemente han surgido reportes en los que se examina la utilidad de realizar detección molecular de M. tuberculosis en muestras de sangre u orina para la detección de la enfermedad pulmonar o extra pulmonar, esto ya que la obtención de este tipo de muestras es mucho más sencilla y menos agresiva que la obtención de lavados bronco-alveolares o biopsias de tejidos y por que la alta sensibilidad de la PCR podría superar incluso a la de los cultivos.

Los resultados de estos estudios demuestran que la PCR de muestras sanguíneas de pacientes con TB pulmonar es positiva en el 37%- 44% de los casos, teniendo una especificidad prácticamente del 100%, la sensibilidad puede llegar a aumentar un 10% si además de investigar muestras sanguíneas también se examinan muestras de orina de los pacientes12-13. En la tabla 1 se muestran, además de estos datos, los resultados de los estudios en pacientes con TB extrapulmonar o diseminada. Los experimentos dejan ver que la sensibilidad reportada depende sobretodo del tipo de muestra más que de problemas en la detección mediante PCR la cual puede llegar a detectar desde 10 copias de ADN de M. tuberculosis en 5 ml de sangre periférica13.

Aunque la sensibilidad de la PCR vs tuberculosis en muestras sanguíneas esta lejos de lo deseable para un estudio que sea la piedra angular del diagnóstico de tuberculosis, estos experimentos han demostrado que la presencia de ADN de M. tuberculosis en la sangre de pacientes con tuberculosis pulmonar es más común de lo que se pensaba con anterioridad.Dada la alta especificidad que se ha reportado de la PCR para detección de M. tuberculosis en sangre, proponemos que un resultado positivo debe considerarse como diagnóstico, mientras que debido a la baja sensibilidad, un resultado negativo deberá de tomarse con cautela antes de descartar la posibilidad de tuberculosis y quizás sea necesario pensar en repetir la PCR en otro tipo de muestra. En caso de que se decida realizar una PCR para detección de M. tuberculosis en sangre, se requerirá de una muestra de por lo menos 5 ml de sangre periférica anti-coagulada con EDTA, la cual deberá de ser referida al laboratorio a la brevedad posible.

Sin embargo cuando se sospeche de tuberculosis pulmonar y en caso de que no resulte extremadamente complicado o agresivo para el paciente, siempre será preferible realizar el estudio en una muestra de origen pulmonar (expectoración, lavado bronquial, derrame pleural, etc.). En el caso de que se sospeche de TB extrapulmonar la detección mediante PCR en sangre puede resultar de utilidad siempre tomando en cuenta las limitaciones de la prueba antes mencionadas y sin dejar de lado todos los demás datos clínicos útiles para definir a la enfermedad.

Bibliografía
1. - World Health Organization. 1995. WHO Report on the tuberculosis epidemic.
2. - Nolte FS, Metchock B. 1995. Mycobacterium, pp 400-437: Manual of Clinical Microbiology, 6th ed., Murray PR, et al, American Society for Microbiology, Washington D.C.
3. - Bloom BR, Murray CJ. 1992. Science. Aug 21; 257(5073):1055-64.
4. - Bottger EC. 1991. Immun Infect. Oct; 19(5):143-52.
5. - Daniel TM. 1990. J Lab Clin Med. Sep; 116(3):277-82
6.-Hermans PW, Schuitema AR, Van Soolingen D, Verstynen CP, Bik EM, Thole JE, Kolk AH, van Embden JD. 1990 J Clin Microbiol. Jun; 28(6):1204-13.
7. - D´Amato RF, Wallman AA, Hochstein LH, Colaninno PM, Scardamaglia M, Ardila E, Ghouri M, Kim K, Patel RC, Miller A. 1995 J Clin Microbiol. Jul; 33 (7):1832-34
8. – Parashar D, Chauhan DS, Sharma VD, Katoch VM. 2006 Indian J Med Res. Oct:385-98
9. – Katoch VM. 2004 Indian J Med Res. Oct:418-28
10. – Reischl U, Lehn N, Wolf H, Naumann L. 1998 L. J. Clin Microbiol. Oct; 36(10):2853-60
11. – Scarparo C, Piccoli P Rigon A, Ruggiero G, Scagnelli M, Piersimoni C. 2000 J. Clin Microbiol. Apr; 38(4):1559-62
12. – Rebollo MJ, San Juan Garrido R, Folgueira D, Palenque E, Díaz-Pedroche C, Lumreras C, Aguado JM, 2006 Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 56:141-46
13. – Ahmed N, Mohantly AK, Mukhopadhyay U, Batish VK, Grover S. 1998 J Clin Microbiol. Oct; 36 (10):3094-95

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El virus de la hepatitis C (VHC) es un gran problema de salud. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que en el mundo hay aproximadamente 200 millones de personas infectadas es decir el 3% de la población mundial.

Aproximadamente se presentan de 3 a 4 millones de nuevos infectados cada año.  En Estados Unidos el número de infectados por el virus de la hepatitis C es cuatro veces mayor que el número de infectados por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH). En México la prevalencia del VHC en 1997 era del 0.7%.

El VHC se propaga por medio del contacto de sangre sin infectar con sangre de una persona infectada (trasmisión por vía parenteral), se puede contraer la infección al:

•    Recibir prácticas médicas con mala esterilización (odontólogo, podólogo, etc.)
•    Pincharse con una aguja contaminada con sangre infectada (trabajadores de la salud pueden contraer la hepatitis C de esta forma)
•    Compartir agujas para inyectarse drogas
•    Inhalar drogas por aspiración compartiendo el instrumento con que se aspira
•    Ser nacido de una madre que tiene la hepatitis C
•    Mediante relaciones sexuales
•    Las personas que recibieron una transfusión de sangre o un trasplante de algún órgano antes de 1992, podrían tener hepatitis C.

Antes de 1992, los médicos no podían detectar el virus de la hepatitis C en la sangre, por lo que multitud de personas recibieron sangre infectada. Las personas que recibieron una transfusión de sangre o un trasplante antes de 1992, pueden pedir a su médico que le haga la prueba de la hepatitis C.

La infección con VHC causa el 20% de los casos de hepatitis aguda y el 70% de los casos de hepatitis crónica, el 40% de los casos de cirrosis, el 60% de los carcinomas hepatocelulares y ocasiona el 30% de los transplantes de hígado.

Los primeros seis meses después de la infección prácticamente transcurren sin síntomas, después de algunos años el síntoma más común es la fatiga. Otros síntomas incluyen fiebre tenue, dolor en músculos y articulaciones, nausea, vomito, pérdida del apetito, dolor abdominal vago, y a veces diarrea. Los síntomas pueden confundirse con gripa que viene y va, y es frecuente que sean tan tenues que el paciente no se da cuenta. El individuo puede mantenerse asintomático pero altamente contagioso por años o décadas.

En general, en la hepatitis crónica hay niveles elevados de enzimas hepáticas y los sueros de los pacientes son reactivos para la prueba anti-VHC. Después de algunas décadas de enfermedad crónica subclínica (20 años en promedio) se produce cirrosis, y aproximadamente 10 años después con frecuencia se produce un carcinoma hepatocelular. El diagnóstico mediante inmunoanálisis puede detectar el 95% de los pacientes con infección crónica, pero la frecuencia de detección es menor (50-70%)  durante la infección aguda. Además hay un alto grado de falsos positivos, ya que este tipo de pruebas detectan la presencia de anticuerpos contra el VHC, pero no identifican directamente la presencia del virus. Por lo tanto se requieren estudios confirmatorios por diagnóstico molecular, como la detección mediante la reacción en cadena de la polimerasa o PCR, la cual detecta directamente la presencia del VHC.

También es importante determinar la Carga Viral de VHC mediante PCR cuantitativa, es decir, el número de virus por mililitro de sangre, esto es importante para determinar el grado de la enfermedad y la respuesta al tratamiento. El tratamiento de la enfermedad consiste en la administración de antivirales (rivavirina) e interferón alfa. Sin embargo las terapias actuales no eliminan el virus en todos de los pacientes, y no existen vacunas disponibles.

Los virus de la hepatitis C actualmente se clasifican en 6 genotipos, los cuales a su vez pueden dividirse en subtipos HCV1 (1a,1b,1c),  HCV2 (2a,2b,2c,2k), HCV3 (3a,3b,3k,10a), HCV4 (4a), HCV5 (5a), HCV6 (6a,6b,6d,6h,6k). Se conoce que existen diferencias asociadas al genotipo de importancia clínica, entre las que se encuentran: 1) la respuesta al tratamiento con interferón y rivavirina, 2) la patogénesis de la infección, 3) el desempeño de algunos ensayos diagnósticos, 4) la distribución geográfica. Los pacientes infectados con los subtipos 1b y genotipo 4 responden pobremente a la terapia con interferón alfa (<8%), en comparación con la tasa de respuesta de los pacientes con los subtipo 1a (15-20%), o subtipos 2 o 3a (>30%). Por otra parte la terapia combinada (interferón/rivavirina) prolongada a 48 semanas en lugar de 24 semanas, casi duplica la tasa de respuesta para el genotipo 1b, mientras que  para otros genotipos diferentes del 1 no hay beneficio en la tasa de respuesta. Debido a ello, se ha propuesto que la genotipificación del VHC mediante PCR y Secuenciación debería realizarse antes del tratamiento para decidir el régimen del mismo.

En Bimodi ofrecemos la realización de todos estos estudios moleculares. Como ya se mencionó esta infección permanece asintómatica por muchos años, por lo tanto es importante poder detectarla a tiempo mediante análisis de laboratorio. Una hepatitis C detectada y tratada a tiempo puede significar la diferencia entre eliminar al virus o morir a causa de él.

“Tecnología de Vanguardia al Servicio de la Salud”

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El trasplante de órganos y tejidos humanos es uno de los avances más importantes de la medicina moderna. Este avance es resultado de una larga serie de investigaciones de las diversas especialidades medico-biológicas, las cuales han permitido entre otras cosas el correcto manejo de los inmunosupresores que hoy día se emplean para lograr un trasplante exitoso, así como la adecuada selección del binomio donador - receptor.

Desde las primeras experiencias de trasplante se puso de manifiesto la imposibilidad de mantener durante largo tiempo un injerto funcional. Este fracaso pronto se atribuyó a mecanismos agresivos del receptor contra el donador.

Es por esto que antes de realizar un trasplante debe valorarse la compatibilidad antigénica entre el receptor y el donador, con la finalidad de optimizar la supervivencia del injerto y minimizar posibles reacciones inmunológicas. Así como realizar otras pruebas para valorar infecciones latentes de Citomegalovirus, Epstein Barr, VIH, Hepatitis B y C que puedan poner en peligro la vida del paciente que se encuentra inmunosuprimido.

El estudio de compatibilidad es una prueba que evalúa unas proteínas llamadas antígenos leucocitarios humanos (HLA, por sus siglas en inglés), los cuales se encuentran en la superficie de casi toda célula del cuerpo humano. Estos antígenos se encuentran en grandes cantidades en la superficie de los glóbulos blancos y le ayudan al sistema inmunitario a establecer la diferencia entre los tejidos corporales y las sustancias extrañas.

Los resultados de este examen se pueden utilizar para identificar la buena compatibilidad para injertos de tejido y trasplantes de órganos, como el trasplante de riñón o el trasplante de médula ósea.

Cada persona tiene una serie de antígenos HLA relativamente únicos que hereda de sus padres. Cada quien tiene la mitad de sus antígenos HLA compatibles con la mitad de los antígenos HLA de su madre y la otra mitad compatible con la mitad de los de su padre. Es improbable que dos personas sin ningún parentesco presenten la misma estructura de HLA.
Existen dos clases de antígenos de histocompatibilidad, HLA clase I y HLA clase II:

Los principales antígenos HLA Clase I están codificados por los genes  HLA-A, HLA-B y HLA-C, estos se expresan en la superficie de casi todas las células nucleadas del organismo.

Los antígenos HLA Clase II están codificados por los genes HLA-DR, HLA-DQ y HLA-DP, y se expresan solamente en la superficie de ciertos tipos celulares.

Una característica de los antígenos de histocompatibilidad es su extremo polimorfismo (muchas formas). Se heredan como caracteres autosómicos codominantes, es decir, cada individuo tiene dos copias de cada uno de los genes una que hereda de su padre y otra de su madre, estas copias suelen ser distintas entre si y ambas copias de cada gen se expresan por lo que en la superficie de las células existirán proteínas producidas por cada una de las dos copias.  De esta manera un individuo expresa tanto los antígenos de histocompatibilidad derivados del cromosoma materno como los del cromosoma paterno.

Los genes HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DR, HLA-DQ y HLA-DP se encuentran juntos en un solo cromosoma por lo que suelen heredarse en bloque y conforman lo que se conoce como un haplotipo. El conjunto de los dos haplotipos (uno heredado de cada progenitor) conforma el genotipo.

Los trasplantes de órganos varían en cuanto a sus requerimientos de histocompatibilidad, desde el trasplante de médula ósea que requiere una histocompatibilidad estricta, hasta el trasplante de hígado, en el cual, entre otros factores, la urgencia clínica impulsa a soslayar la compatibilidad donante - receptor.

Por otro lado, dado que estas moléculas están involucradas en la respuesta inmune, se está investigando su relación con enfermedades autoinmunes. Por ejemplo, el antígeno HLA-B27 se encuentra en muchas personas (pero no en todas) con espondilitis anquilosante y síndrome de Reiter. Además cada vez es más evidente que la susceptibilidad a ciertas enfermedades infecciosas está relacionada con los antígenos HLA.

La tipificación del HLA es la identificación de los antígenos de histocompatibilidad o la determinación del genotipo. Para llevarla a cabo, existen distintos métodos, principalmente el método serológico y los métodos de biología molecular (ADN)
Existen en general tres distintas formas de tipificar a los antiguos linfocitarios humanos (HLA) mediante tecnologías moleculares (las tecnologías serológicas son obsoletas y no funcionales) estas son:

•    RESOLUCION BAJA (PCR-SSP Sequence Specific Primer):
Esta metodología consiste en realizar reacciones de PCR (Reacción en cadena de la Polimerasa) alelo específica. En teoría se podría diseñar un PCR específico para cada uno de los alelos, sin embargo dado el enorme número de alelos distintos esto resulta inoperante, de manera que se utilizan un número limitado de PCRs que amplifican cada una de ellas a  varios alelos distintos. Por lo tanto no es posible distinguir entre dos alelos que son amplificados por la misma PCR.
Esta metodología solamente es útil para tipificar a un donador y a un receptor que están altamente emparentados (por ejemplo padre e hijo), pues aunque no se tenga buena resolución, si se obtiene una tipificación similar se supone que serán compatibles ya que comparten los mismos alelos puesto que los heredaron de la misma familia.

•    RESOLUCION MEDIA (PCR-SSOP Sequence-Specific Oligonucleotide Probes):
Esta técnica consiste en realizar PCRs con iniciadores genéricos que se unen a regiones constantes de los diferentes alelos, entre ambos iniciadores quedan comprendidas las regiones polimórficas que contienen las variaciones nucleotídicas que distinguen a un alelo de otro. El producto de la PCR es hibridado con sondas que reconocen a los distintos alelos. Al igual que con los SSP resulta imposible e inoperante generar una sonda única para cada alelo ya que los polimorfismos a veces son de tan solo una base del ADN o se encuentran muy separados uno de otro por lo que una sola sonda no puede detectar ambos. En esta metodología una misma sonda hibrida con varios alelos y un alelo es reconocido por varias sondas dando un patrón de hibridación definido para cada alelo, sin embargo siguen existiendo ambigüedades pues de todas maneras no se puede generar un patrón único por alelo (o mejor dicho por combinación de alelos pues hemos de recordar que cada individuo tiene dos alelos de cada gen).
Esta tecnología se puede elegir cuando se van a analizar muchos individuos simultáneamente, como en los programas de trasplante de médula ósea, para hacer un primer tamizaje en busca de donadores no relacionados.

•    RESOLUCION ALTA (PCR-Secuenciación):
En esta técnica nuevamente se realizan PCRs con iniciadores genéricos que amplifican a todos los alelos de un gen, posterior mente los productos de PCR se secuencían y los resultados de la secuencia se comparan con bases de datos de todos los alelos conocidos para discernir de que alelos se trata. Dado que durante la amplificación y la secuenciación se trabaja simultáneamente con los dos alelos del individuo, incluso aquí pueden llegar a existir ambigüedades pues la combinación de dos alelos puede llegar a generar la misma secuencia que la combinación de otros dos alelos. Para la resolución de estas ambigüedades pueden emplearse iniciadores específicos que permiten discernir cual de las dos parejas de alelos es la real. No obstante incluso con estos iniciadores pueden llegar a existir algunos remotos casos en los que, la ambigüedad no puede ser eliminada. Sin embargo, estas ambigüedades suelen ser en secuencias que no llegan a afectar el producto protéico del gen y que por lo tanto no tienen relevancia clínica.
Esta metodología esta considerada como el estándar de oro y de hecho los estuches comerciales de las otras dos metodologías deben de validar sus resultados mediante secuenciación. Esta metodología debe de utilizarse cuando se ha elegido a un donador no emparentado para verificar la compatibilidad entre el y el receptor, es difícil utilizarla como método de tamizaje por la dificultad para procesar muchas muestras simultáneamente.

BiMoDi ofrece el estudio de tipificación de HLA mediante secuenciación, por lo que puede establecer el genotipo tanto del los genes Clase I(HLA-A y HLA-B) como de Clase II (HLA-DR y HLA-DQ) con la más ALTA RESOLUCION comercialmente disponible. Este estudio junto con la determinación del grupo sanguíneo y las pruebas cruzadas, constituyen el pilar para la toma de decisión al elegir una pareja donante-receptor para un trasplante.

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Hoy en día resulta sencillo someterse a un Análisis de ADN para realizar una prueba de paternidad, en estos estudios se compara el ADN de un supuesto padre con el de un hijo para discernir si se encuentran o no genéticamente relacionados. Sin embargo existen ocasiones en que se desea establecer el parentesco entre dos personas sin que se esté buscando precisamente un estudio de paternidad, por ejemplo puede ser deseable realizar estudios de hermandad o a entre abuelos y nietos, algunas de estas preguntas pueden ser contestadas gracias al Análisis de ADN para estudio del Cromosoma Y.
El cromosoma Y, determina el sexo de una persona. Los varones tienen en su genoma un cromosoma Y y un cromosoma X, mientras que las mujeres tienen dos cromosomas X, cuando un varón produce espermatozoides la mitad de ellos tienen solamente un cromosoma Y y la otra mitad solamente un cromosoma X, mientras que los óvulos de las mujeres tienen todos un cromosoma X, cuando un espermatozoide con cromosoma X se une a un ovulo el embrión resultante tiene dos cromosomas X y será una niña, pero si el espermatozoide que fecunde al ovulo tiene cromosoma Y entonces el embrión tendrá un cromosoma Y y un cromosoma X y será un niño.
De lo anterior se desprende que todos los hombres comparten con su padre el mismo cromosoma Y, el cual a su vez fue heredado del abuelo paterno. También se concluye que dos hermanos, hijos del mismo padre tienen el mismo cromosoma Y que ambos heredaron de su padre, lo mismo sucede con dos primos que comparten al abuelo paterno.
Por lo tanto el estudio del cromosoma Y nos permite estudiar la línea paterna de parientes de un individuo. Inclusive saltándonos alguna generación, es decir se puede discernir si una persona es el abuelo paterno de otra sin necesidad de estudiar a la generación intermedia o si dos hombres son hermanos, hijos del mismo padre sin necesidad de estudiar al padre o si dos primos comparten al mismo abuelo paterno sin analizar a sus padres o al abuelo.
El estudio del cromosoma Y, además permite analizar muestras en las que el ADN de un varón este mezclado con el ADN de una mujer, esto sin que el ADN de la mujer interfiera en el análisis. Tales casos ocurren en agresiones sexuales, donde suele recuperarse una muestra de exudado vaginal la cual contiene una mezcla de células de la ofendida y del agresor. Si el ADN presente en este tipo de muestras se quiere comparar con muestras de un acusado, es de suma importancia contar con metodologías que permitan analizar la muestra adecuadamente, el análisis del cromosoma Y permite analizar muestras donde el ADN de la mujer se encuentre hasta 1000 veces más concentrado que el ADN de varón.
Los estuches comerciales de análisis del cromosoma Y han sido diseñados para realizar identificación de individuos en casos como los mencionados en el párrafo anterior, amplifican por lo menos un conjunto de 11 microsatélites o STR (conocidos como el Haplotipo Mínimo Europeo más los microsatélites recomendados por el Grupo Científico de Trabajo en Métodos de Análisis de ADN -Scientific Working Group on DNA Analysis Methods, SWGDAM-). Pues se tiene el consenso de que con éste es el conjunto mínimo de microsatélites que periten hacer una buena identificación de individuos. La capacidad de discriminación de este conjunto de marcadores en distintos grupos étnicos se ve en la siguiente tabla:

Los microsatélites del Haplotipo Mínimo Europeo más los recomendados por el SWGDAMa  son los once siguientes: DYS19, DYS385a, DYS385b, DYS389 I, DYS389 II, DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS438 y DYS439.

El análisis de microsatélites ha revolucionado la medicina forense y hoy en día estas metodologías se encuentran cada vez más a la mano del ciudadano común. En Biología Molecular Diagnóstica ofrecemos la posibilidad de realizar Análisis del Cromosoma Y, brindando a nuestros clientes con nuevas herramientas de estudio para que logren responder sus dudas con una alta certeza; contamos con el instrumental requerido para llevar a cabo la totalidad de estos estudios en nuestro laboratorio y con  personal altamente calificado para su realización.

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